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基因测序-(Nova6000/MGI-T7)
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单细胞测序服务
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细胞免疫分析服务
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蛋白质组学检测服务
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小分子代谢物检测服务
高通量细胞分选
流式分选在流式分析的基础上，能将感兴趣的目标细胞“挑拣”出来，作为后续培养扩增、蛋白鉴定、测序等实验操作的素材。对于分选的挑战，除了需要快速准确分选外，还要使取得的细胞具有高活力、高纯度、高回收率。
使用仪器：Moflo XDP（3激光10色）
应用领域：免疫学、血液学、肿瘤学、骨髓和器官移植、抗肿瘤药物研究、疫苗研究、基础医学研究等
项目优势：
基于单细胞测序、SMART Seq2、RNA Seq等测序的细胞原材料获取，高效筛选高活率、高纯度目的细胞，流式分选方式最为可取。联合公司测序、单细胞测序、蛋白组学及生信平台，可实现从原材料到出具报告的一站式服务。
项目周期：
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项目类型 |
项目内容 |
服务周期 |
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高通量细胞流式分选 |
稳转细胞系筛选 |
1-3个工作日 |
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抗原特异性B细胞筛选 |
1-3个工作日 |
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96-1536孔板单细胞分选 |
1-3个工作日 |
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多色、四路分选 |
1-3个工作日 |
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分选目的细胞用于下游测序、单细胞测序、蛋白组学等 |
1-3个工作日 |
署名文章： RNF186/EPHB2 Axis Is Essential in Regulating TNF Signaling for Colorectal Tumorigenesis in Colorectal Epithelial Cells.
发表期刊：The Journal of Immunology
样本类型：稳转细胞系
应用技术：流式细胞术等
文章概述：研究团队发现EPHB2是TNF诱导的结直肠上皮细胞信号激活和促炎细胞因子产生所必需的。在TNF刺激后，EPHB2被其E3连接酶RNF186泛素化。然后，泛素化的EPHB2招募并进一步磷酸化TAB2的9个酪氨酸位点，促使TAB2结合TAK1，从而激活NF-kB信号通路，产生促肿瘤细胞因子，如TNF。在RNF186敲除小鼠中，结直肠上皮细胞中TNF信号通路的缺陷，与野生型对照小鼠相比，RNF186敲除小鼠的结肠炎有助于的结直肠癌模型表型如肿瘤数量和大小显著减少。
此外，更惊喜的是，与野生型EPHB2相比，在一个结直肠癌家族中发现的EPHB2基因突变体（D862N）是一种功能取得性突变，促进了TNF信号通路的激活。由于RNF186增加EPHB2-D862N泛素化，进一步增强了对TAB2的亲和力，导致更强烈地激活NF-kB信号通路和肿瘤发生过程中TNF的产生，该研究也揭示了EPHB2突变导致结肠癌发生的机制。
96孔板分选敲除基因的GFP阳性细胞系进行单克隆筛选
（1）常规分选及回测
常规GFP分选
（2）多色分选
（3）开发优化分选方案
Q：如何有效取得组织样淋巴细胞的分选？
A：建议可以Ficoll分离或磁珠分选富集后再上流式分选。
（4）分选助力单细胞测序、SMART-Seq2
单细胞测序一站式服务
活细胞分选 CD45目的细胞分选
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样本类型 |
样本要求 |
注意事项 |
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细胞 |
培养中的细胞 |
培养瓶内加满细胞培养液，拧紧瓶盖，封口膜封口 |
市内运送请保持4℃（若是冰袋，需实行物理隔离，避免冻住），2小时内送至我方实验室；若寄送样本，只能是冻存细胞，干冰运输 |
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细胞悬液 |
对数生长期的贴壁细胞经胰酶消化成（或悬浮细胞不经胰酶）单细胞悬液、PBS洗涤后，进行活细胞计数，活力>80%，调整细胞浓度为（5-10）×105细胞/mL |
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冻存细胞 |
细胞浓度为（5-10）×105细胞/mL，活力>80% |
干冰寄送 |
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血液 |
全血 |
抗凝全血（体积需根据具体检测项目类型进行沟通），确认血液无凝血、无溶血 |
1.若需检测胞内细胞因子，抗凝血建议使用肝素抗凝管，避免使用EDTA抗凝管； 2.血样的运送过程中，避免剧烈碰撞，避免温度急升急降，保持在4℃环境（若是冰袋，需实行物理隔离避免血样冻住），24h内送至我方实验室； 3.若无法立即检测，需冻存不能直接全血冻，需分离PBMC后再冻存；冻存样本需干冰运输。 |
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PBMC |
裂红液裂红或者淋巴分离液分离取得PBMC，冻存 |
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组织样（脾、淋巴结、肺、皮下瘤等） |
新鲜组织不小于0.5cm ×0.5cm ×0.5cm，剔除坏死组织并清洗干净血液；组织保存液保存，保持在4℃环境（若是冰袋，需实行物理隔离避免组织冻住），24h内送至我方实验室 |
1.新鲜组织样就地取材，1h内尽快使用保存液进行保存； 2.若样本48h内无法进行检测，需冻存，不能直接冻组织，需自行处理成单细胞悬液后，冻存，干冰运输 |
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