细胞表型与功能分析
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Q&A
①技术介绍
本技术基于荧光标记和激光检测的高通量、多参数分析技术，在单细胞水平上对细胞的表型特征与功能状态进行同步、多参数、精准分析。可检测内容包括：细胞群与细胞亚群分析、细胞表面/胞内标志物表达、细胞增殖、凋亡、胞内细胞因子分泌、信号通路激活、细胞周期分布等。应用方向涵盖：免疫功能评估（T/B细胞活化、巨噬细胞极化、NK细胞杀伤功能检测）、肿瘤细胞分析（凋亡、周期分布、侵袭相关功能检测）、药物作用机制研究（药物对细胞增殖、凋亡、细胞因子分泌的调控）、感染与自身免疫疾病监测（免疫细胞功能紊乱筛查）、干细胞功能表征等，为科研与临床决策给予全面的细胞数据支持。
②技术路线
单细胞制备 → 死活染料染色 → 胞膜染色 → 细胞固定 → 细胞破膜 → 胞内/核内指标染色 → 流式方案建立 → 上机检测 → 数据分析 → 结果交付
③产品优势
1. 高通量与快速检测：每秒可分析数百至数千个细胞，适用于大规模细胞群体分析（如免疫分型、肿瘤异质性研究、药物筛选等），显著提高实验效率。
2. 单细胞水平精准分析：可聚焦单个细胞，精准量化每一个细胞的表型与功能状态，清晰呈现细胞亚群的异质性，捕捉群体分析中被掩盖的少量异常细胞。
3. 多参数同步检测：支持多色荧光标记组合，可在单个细胞上同时检测“表面标志物 + 功能指标”（如CD4/CD8分型 + IFN-γ/TNF-α/IL-4分泌 + 增殖状态 + 凋亡水平），一次性获取丰富数据，大幅减少样本用量，缩短实验周期，提升研究效率。
4. 灵活适配多种样本与场景：可根据研究需求定制个性化检测方案，涵盖细胞表型、增殖、凋亡、活化、细胞因子、信号通路、细胞周期等多种项目；适配外周血、骨髓、肿瘤组织、细胞培养样本等，满足基础科研、药物研发、临床检测等不同需求。
④服务内容
样本制备 | 项目内容 | 服务周期 |
细胞原材料获取 | 全血PBMC分离 | 1-3个工作日 |
组织单细胞悬液制备 | 1-3个工作日 | |
细胞鉴别 | 人间充质干细胞表型分析5项（CD73、CD90、CD105、CD45、CD19） | 1-3个工作日 |
人间充质干细胞表型分析9项 | 1-3个工作日 | |
造血干细胞表型分析（CD45、CD34) | 1-3个工作日 | |
CIK细胞表型分析（CD3、CD56) | 1-3个工作日 | |
T细胞表型检测（CD3、CD4、CD8) | 1-3个工作日 | |
B细胞表型检测（CD3、CD19) | 1-3个工作日 | |
NK细胞表型分析（CD3、CD16、CD56) | 1-3个工作日 | |
调节性T细胞（Treg)细胞表型检测 | 1-3个工作日 | |
植物倍性评估 | 1-3个工作日 | |
植物基因组大小 | 1-3个工作日 | |
细胞功能检测 | 细胞周期检测与分析 | 1-3个工作日 |
细胞活力检测与分析 | 1-3个工作日 | |
细胞凋亡检测与分析 | 1-3个工作日 | |
细胞计数 | 1-3个工作日 | |
细胞迁移 | 5-7个工作日 | |
淋巴细胞增殖抑制检测 | 15-20个工作日 | |
成骨细胞分化 | 21-25个工作日 | |
成软骨细胞分化 | 21-25个工作日 | |
成脂肪细胞分化 | 21-25个工作日 | |
细胞表型分析 | TBNK细胞亚群分析 | 1-3个工作日 |
T细胞亚群及功能分析 | 1-3个工作日 | |
Th1/Th2/Th17细胞表型检测 | 1-3个工作日 | |
辅助T细胞亚群及功能分析 | 1-3个工作日 | |
B细胞亚群及功能分析 | 1-3个工作日 | |
MDSC/巨噬/DC/粒细胞分型及功能分析 | 1-3个工作日 | |
个性化细胞表型分析 | 胞内因子检测与分析 | 3-5个工作日 |
胞膜标志物检测与分析 | 3-5个工作日 | |
胞内或核内标志物检测与分析 | 3-5个工作日 | |
整体项目 | 实验设计到数据报告 | 一项一议 |
脐带来源间充质干细胞顺利获得线粒体转移减轻急性缺血性卒中T细胞亚群偏移及Th17/Treg失衡
研究背景：
急性缺血性脑卒中（AIS）会引发继发性损伤，加重神经损伤并阻碍恢复。外周免疫反应对卒中预后起关键作用，但免疫疗法临床效果不佳，且对T细胞动态关注有限。脐带间充质干细胞（UMSCs）因免疫调节特性有治疗潜力，可调节免疫反应、减轻神经炎症。本研究调查AIS后的T细胞动态，以及UMSCs如何减轻免疫失调以制定更好治疗策略。
研究方法：
在脑卒中发生72小时内招募AIS患者（NIHSS评分0 - 15），在第0天（入组）和第7天采集外周血样本。采用流式细胞术召开细胞表型分析，用CBA定量测定血浆细胞因子水平，用MitoTracker标记UMSCs中的线粒体，检测活性氧以及线粒体膜电位的改变。
研究成果：
造模后1天、3天、7天三个时间点检测相关指标，免疫检测显示，模型对照组的CD4+T细胞比例较正常对照组下降30%以上，同时模型对照组的Th17细胞比例升高约25%，Treg细胞比例下降约20%。而干细胞处理组在造模后3天，CD4+T细胞比例开始回升，到7天时较模型对照组高20%，Th17细胞比例较模型对照组低18%，Treg细胞比例较模型对照组高15%，Th17/Treg的比例也接近正常水平。结果说明干细胞处理能减轻脑损伤。
研究结论：
脐带间充质干细胞能顺利获得向T细胞转移线粒体，改善T细胞的能量代谢，进而减轻急性脑梗大鼠的T细胞亚群偏移和Th17/Treg失衡，最终实现减轻脑损伤、促进神经功能恢复的效果。该研究为脐带间充质干细胞用于急性脑梗治疗给予了实验支持，也明确了线粒体转移在干细胞免疫调节中的关键作用，为后续相关治疗方案的开发给予了参考。
参考文献：
Chen S, Han C, Shi Z, et al. Umbilical mesenchymal stem cells mitigate T-cell compartments shift and Th17/Treg imbalance in acute ischemic stroke via mitochondrial transfer. Stem Cell Res Ther. 2025；16:134. doi:10.1186/s13287-025-04224-6
细胞表型与功能分析送样标准
细胞样本
1.样本类型：贴壁细胞、悬浮细胞、冻存细胞、固定后的细胞；
2.样本数量：检测表面蛋白时，细胞数量为1×106
血液样本
1.样本类型：来源于人或动物（小鼠、大鼠等）的血液样本；
2.样本数量：采用裂红的方法检测表面蛋白时，每个样本体积不少于100μL；
采用裂红的方法检测胞内或核内蛋白指标时，每个样本体积不少于300μL；
采用密度梯度离心的方法检测表面蛋白时，每个样本体积不少于1mL；采用密度梯度离心的方法检测胞内或核内蛋白时，每个样本体积不少于3mL；在首次送样时，除开检测样本，还需额外给予单个样本体积×n（指标数）的样本量用于检测方案的设置。
组织样本
1.样本类型：来源于人或动物（小鼠、大鼠等）的脾脏、淋巴结、肺、皮下瘤等；
2.样本数量：新鲜组织不小于黄豆大小，对于目的细胞含量较低的组织类型，需要根据首次实验评估后的结果，加大样本的送样量。
在首次送样时，除开检测样本，还需额外给予部分组织样本用于检测方案的设置。
其他体液样本
1.样本类型：来源于人或动物（小鼠、大鼠等）的腹水、脑脊液、血清、血浆、细胞培养上清等；
2.样本数量：若样本用于细胞水平流式检测，细胞量需满足1.1.2中的样本数量要求；若样本用于Elisa检测，单个指标所需样本体积需不少于100μL；若样本用于液相细胞因子检测，单个试剂盒所需样本体积不少于50μL；
植物样本
1.样本类型：植物叶片、根、茎等。除了待测目标样本，倍性检测须给予同源近亲物种做参照样本。基因组大小检测需给予已知基因组大小的同源近亲物种做参照，也可给予已知且稳定的基因组大小物种做参照，如拟南芥等。
2.样本数量：叶片大小按1cm×1cm评估，大概10片左右。其他类型需至少3g以上新鲜的组织。
样本处理及运输
1.细胞样本：
①贴壁细胞：对于贴壁培养的细胞，运送前，需培养瓶内加满细胞培养液，拧紧瓶盖，加冰袋24h内运输至实验室，运输过程实行物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻；
②悬浮细胞：对于悬浮培养的细胞，运送前，需将培养基中的细胞转移至密封性较好的离心管中，拧紧盖子后，加冰袋24h内运输至实验室，运输过程实行物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻。不要采取多孔板送样，运输时，容易因为晃动造成孔间污染；
③冻存细胞：对于冻存的活细胞，采用干冰寄送。需保证在样本运输至实验室时，干冰未完全挥发，并完整覆盖样本，样本本身没有融化现象；
④离心5min，弃上清；加入1mL的4%多聚甲醛固定液，混匀。转移至1.5mL的离心管，室温固定15~20min，400g，离心5min，弃上清；PBS洗涤一次后，用1mL的PBS重悬，混匀，盖紧，加冰袋运输至实验室，运输过程实行物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻；
2.血液样本
①若样本用于检测表面蛋白，则EDTA和肝素抗凝剂两种都可使用。
②若样本用于胞内或核内蛋白因子检测，则建议使用肝素抗凝剂。
采血后，充分混匀，避免出现凝血的现象。加冰袋24h内运输至实验室，运输过程实行物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻；
3.组织样本
组织样本采集后，对于体积较大的组织，需将组织剪成黄豆大小的块状，用PBS或生理盐水冲洗后，快速转移至组织保存液中，需保证组织保存液完全浸润组织样本。
加冰袋48h内运输至实验室，运输过程实行物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻，样本完全浸润在组织保存液中。
4.其他体液样本
①若直接送检腹水或脑脊液样本，需在样本采集后，4h内运送至我方实验室。加冰袋运输，运输过程实行物理隔离，避免低温产生冰渣。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻。
②若直接送检血清、血浆、细胞培养上清等，在收集样本后，需及时将样本放在-80℃冰箱中冻存。采用干冰寄送，需保证在样本运输至实验室时，干冰未完全挥发，并完整覆盖样本，样本本身没有融化现象；
5.植物样本
①样本采集后，需尽快用打湿的纸包裹，自封袋封装，并在袋子上实行对应的标记；
②若为寄生培养的植物，建议带盆整株送检；
加冰袋运输，运输过程实行物理隔离，避免低温冻上植物样本。样本运输至实验室时，冰袋未完全化冻。
Q1：流式实验中必须设置哪些对照？
A1：合理的对照是流式实验成功的关键。最基本的对照包括：
1.未染色对照：用于设置检测电压和评估细胞自发荧光水平；
2.单染对照：主要用于调节荧光补偿，消除光谱重叠带来的影响。Panel中有几种荧光，原则上就需要设置几个单染管，且其样本处理和荧光素需与全染管保持一致；
3.同型对照或生物学对照：用于评估抗体的非特异性结合背景。
Q2：如何设计一个成功多色流式细胞术panel？
A2：设计panel前，第一时间要明确生物学问题及目标标志物的相对表达水平。基本原则是将最亮的荧光素（如PE、APC）分配给表达量最低的抗原，而将较暗的荧光素（如FITC、Pacific Blue）留给高表达的抗原，以确保所有稀有或弱阳性细胞群都能被清晰检测到。同时，应尽量避免在同一管中选择发射光谱非常接近的荧光素，以减少光谱重叠和补偿难度
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